Explicação detalhada da volatilização do reagente em experimentos de PCR

Explicação detalhada da volatilização do reagente em experimentos de PCR.

No experimento de PCR, após adicionar o sistema de reação, cobrimos cuidadosamente a tampa e confirmamos repetidamente que a tampa está fechada para evitar a volatilização do reagente. Mas às vezes também temos dúvidas: confirmamos que a tampa está bem fechada, mas após a conclusão do experimento, o reagente ainda evaporará. qual é a razão?

De fato, a volatilização do reagente é um dos problemas mais comuns nas experiências de PCR e existem muitos fatores que afetam a volatilização do reagente.

A evaporação refere -se a isso durante o experimento de PCR, a solução de reação evapora em alta temperatura e depois condensa na parede da garrafa ou na tampa superior para formar névoa de água ou gotículas de água, ou transbordar diretamente da lacuna de ar da tampa ou filme da garrafa, resultante Em uma mudança na concentração da solução de reação. Alterações, a quantidade de solução de reação diminuiu e algumas até evaporaram à secura, resultando em experimentos inválidos.

1. Pressão quente da tampa, temperatura

Em experimentos de PCR, geralmente aquecemos a tampa para impedir a condensação do vapor do reagente. A temperatura da tampa aquecida é geralmente maior que a da solução de reação para evitar a condensação de vapores.

As tampas de aquecimento do ciclador térmico podem ser divididas aproximadamente nos quatro tipos a seguir: tampas de aquecimento não ajustáveis, tampas de aquecimento ajustável, tampas de aquecimento adaptável e tampas de aquecimento automáticas. A tampa aquecida ajustável apresenta compressão estanque. Se não for apertado com força, os reagentes evaporam. A evaporação da borda pode ser minimizada aumentando a pressão na tampa aquecida. Às vezes, o tirotecedor pode beliscar o tubo e torcer o botão. Em circunstâncias normais, a cobertura elétrica de aquecimento inteligente pode detectar automaticamente consumíveis de diferentes alturas, comprimir automaticamente consumíveis, e a pressão é uniforme e constante, reduzindo assim os erros de evaporação e manual do reagente e melhorando a precisão e a repetibilidade experimentais.

2. Deformação dos consumíveis

Para vazamentos de vapor, a maioria das pessoas pensa que a pressão da tampa quente não é suficiente. A pressão da tampa quente é muito importante, mas esse é apenas um aspecto. De fato, os consumíveis também são muito importantes.

As placas de orifício de PCR geralmente são feitas de materiais plásticos, que se expandem e se deformem muito após serem aquecidos. A taxa de expansão térmica da base de metal de PCR usada para colocar a placa de orifício de PCR é extremamente baixa e a placa de orifício de PCR não pode se expandir normalmente ao longo do plano após a expansão térmica. O estado de abaulamento torna a cobertura de calor superior incapaz de entrar em contato completamente com a superfície da placa de orifício de PCR, resultando em temperatura e pressão desiguais, causando evaporação do reagente na borda da placa de orifício de PCR e afetando o efeito de detecção de PCR.

3. Consumíveis não são bem selados

O aperto da tampa térmica e dos consumíveis não significa que a tampa do tubo de PCR esteja bem fechada e a qualidade da placa do poço de PCR é irregular. Consumíveis de alta qualidade, a superfície do bico e a tampa são suaves, e a vedação atrás da tampa da caixa é boa e não é fácil de vazar. Os consumíveis inferiores têm bicos desiguais e linhas radiais, que podem causar facilmente vazamentos ou até secar.

Portanto, em experimentos de PCR, tente escolher consumíveis de alta qualidade e adequados. Ao mesmo tempo, o sistema de reação pode ser expandido para minimizar a influência da evaporação do sistema na reação.