Seleção e uso de placas de cultura de células

Seleção e uso de placas de cultura de células

O princípio da esterilidade estrita na realização de operações celulares também se aplica às placas de cultura de células. Todas as operações devem ser padronizadas e científicas, sem efeitos adicionais no crescimento celular. Um dos problemas mais comuns é garantir a uniformidade das células após a adição da amostra e minimizar os efeitos da mudança média no estado de crescimento das células.

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A tampa é muito solta e faz parte de uma cultura semi-aberta. Isto é para aeração (na verdade, para que o CO2 fora da placa de Petri possa ser totalmente trocado com a placa de Petri para manter o pH do meio).

Tudo tem vantagens e desvantagens, o que obviamente aumenta a possibilidade de poluição. Além disso, isso faz com que o líquido na placa de Petri evapore, o que é notável para a dosagem precisa dos medicamentos. Portanto, as duas medidas a seguir são necessárias a. O ar na incubadora deve estar limpo (luz UV regular, lavagem de álcool e ativação e desligamento da incubadora o mínimo possível) b. A umidade na incubadora deve sempre ser mantida a 100% (um tanque de água com água destilada estéril é colocada na incubadora).
Assim como uma placa de Petri, também é um recipiente com uma tampa de cabeça para baixo e não contaminará. A principal razão é que a borda em forma de "L" da tampa gera pressão de ar negativa para que os microorganismos sejam presos à poeira e a poeira transportada pelo fluxo de ar não pode passar pela borda da tampa que gera a pressão negativa. O efeito de ventilação é somente através da difusão do ar, e nenhum fluxo de ar será gerado, portanto, apenas respira e não penetrará nas bactérias.

Perguntar:
Usando uma placa de 24 poços, em alguns dos poços, existem manipulações (dentro do banco), enquanto outros poços ainda têm células para crescer. Estou preocupado com a contaminação dessa maneira, não sei o que observar.

Responda:
No banco ultra-limpo, se a operação for padronizada, deve ser possível. Eu acho que você pode fazer pleno uso da capa da placa de cultura, tentar expor apenas os orifícios a serem operados e cobrir outros orifícios com capas.
Considere -o de forma abrangente antes do uso e faça pleno uso de todos os orifícios; Se você precisar usar apenas alguns orifícios, poderá usar apenas um lado e cobrir o restante com uma tampa. Estou acostumado a usar o orifício direito primeiro (a mão direita é conveniente para adicionar amostras).
Ao operar, use alguns slides de vidro para aumentar um lado da placa, não abra totalmente a tampa, geralmente sem problemas.

Distribuição desigual de células e soluções.

Perguntar:
Quando as células são semeadas em uma placa de cultura, as células sempre se reúnem na parte periférica, o que devo fazer?

Responda:
Como suas células são misturadas? É pipeta ou sacudir o prato? Se for o último, e se for abalado em círculo, é muito provável que, devido à força centrífuga, as células sejam jogadas na parte circundante, resultando em menos células no meio e mais ao redor!

Aqui está uma boa maneira: antes de cultivar a placa de semente, coloque a placa de cultura na incubadora por algumas horas de saturação e depois retire -a. Ao semear as células, a força deve ser leve. Adicione lentamente para permitir que a suspensão celular flua para os poços da placa, e as células cultivadas crescem substancialmente uniformemente. Lembre -se de nunca sacudir o oscilador ou suas células se agruparão como você disse.

Quanto menor o diâmetro do orifício da placa de cultura, mais óbvio é esse fenômeno. O fenômeno de placas de 24 e 96 poços é inevitável porque a parede do líquido torna o meio de cultura no buraco não um nível de líquido, mas a periferia é alta, assim como um espelho côncavo, no entanto, devido à necessidade de intervenção E outras razões, o uso desses dois tipos de placas de poço não pode adicionar meio de cultura suficiente, para que as células apareçam "agregação de arestas" junto com o meio de cultura. Dependendo do tipo de indicadores que você precisa observar, se for MTT, a imuno -histoquímica afetará os resultados devido à camada celular.

Ao digerir células, preste atenção à pipeta uniformemente para evitar aglomeração de células e a quantidade de meio de cultura nos poços deve ser suficiente. Geralmente, uma quantidade suficiente de meio de cultura deve ser adicionada durante a inoculação e o meio deve ser alterado uma vez quando a intervenção for adicionada. , neste caso, o fenômeno do "conjunto de borda" será aprimorado, então experimente.

Perguntar:
O que estou fazendo é o experimento de formação de placas. É melhor espalhar as células em uma camada uniforme, mas a maioria dos orifícios é boa ao inocular o vírus e alguns não são uniformes. Existem grandes diferenças dentro do grupo celular. Eu gostaria de perguntar quais métodos você tem ao adicionar células.

Responda:
Após a digestão das células, a pipetagem em uma suspensão de célula única é crítica! Verifique se o número de células em cada poço é o mesmo ao dividir!
Obviamente, o paralelismo entre os poços do fator de processamento também é muito importante. Por exemplo, ao adicionar remédio, o medicamento deve ser diluído e misturado para garantir que a concentração de cada poço seja consistente!
Além disso, ao adicionar células e medicamentos, o grupo de teste e o grupo controle devem ser adicionados, por sua vez, para evitar a diferença na densidade celular e na concentração de medicamentos causada pela sequência de adição de amostra!

Perguntar:
O sopro já é uniforme, mas a prancha, 6 buracos e 24 buracos são sempre um pouco desiguais, e eles estão um pouco concentrados no meio. E é claro que a contagem é feita e a densidade de cada orifício é diferente após um dia ou dois, o que afetará a detecção. Existe uma boa estratégia?
Responda:
Se você usar uma pipeta de transferência, não é péssimo a cada vez, porque as células da pipeta afundam automaticamente, e muitas vezes há muitas células nos primeiros poços, e a suspensão celular é frequentemente uniforme, e o líquido é adicionado Para ir em forma de S. rota.

Se uma pipeta for usada, as pontas devem ser manuseadas e as pontas devem ser removidas para evitar danificar as células, para que cada pipeta corresponda a um poço. É mais preciso adicionar orifícios individuais com uma dica. Mas também preste atenção à mistura da suspensão. Para configurar um grupo paralelo, n deve ser grande o suficiente (pode ser calculado). Não agite após o revestimento, pois o tremor pode fazer com que as células se agreguem no meio. É melhor fazer tudo de uma vez.